抗原修复锅采用的修复方法一共有两种
更新时间:2020-02-25 点击次数:1969次
抗原修复锅怎样工作?
看上去,抗原修复锅似我们烹饪的高压锅。这是一款功能*的“高压锅”,主要用于抗原暴露的工作,主要的工作原理也是装玻片的几个分室可以达到高温(>120°C)高压。灵敏的传感控制器来保持一定的温度和压力及一定的时间,这些工作参数都是经过严格的科学实验得到的数据。当达到需要的温度,抗原修复锅会在该温度下保持几分钟,之后锅内玻片被冷却2个多小时,特殊设材质的内锅体控制了锅和玻片的冷却速度。
免疫组织化学方法成功与否关键在于抗原决定簇的保存和暴露。组织经甲醛固定,甲醛的醛基与抗原蛋白的氨基交联,使决定簇的构像改变,从而影响检测蛋白表达。要充分暴露抗原决定簇,通常用到抗原修复锅。强烈推荐EMS*有竞争力的一款产品,适于甲醛固定的组织经石蜡包埋后进行免疫染色前的处理,配合特别的抗原修复缓冲液确保你得到z高质量的免疫染色效果。
(1)抗原修复锅的加热修复法:加热修复法分为高压加热修复法和微波修复法两种:
①高压加热修复法:取一定量枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)于高压锅中,大火加热直至沸腾。将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上,放人己沸腾的缓冲液中。盖上锅盖,扣紧压力阀,继续加热至喷汽。
从喷汽开始计时.1~2分钟后,高压锅离开热源,冷却至室温(稍冷后,可在自来水笼头下加速冷却),取出玻片,先用蒸馏水冲洗2次,再用PBS冲洗2次,每次3分钟。注意加热时间长短的控制很重要,从组织切片放人缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5―8分钟为好.
时间过长可能会使染色背景加深。缓冲液的量必须保证能浸泡到切片,用过的枸橼酸缓冲液不能反复使用。
②抗原修复锅的微波修复法:取一定量pH6.0枸橼酸盐缓冲液(缓冲液量不得小于500m1),于微波盒中,微波加热直至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上。放人己沸腾的缓冲液中,中高档微波继续处理15―20分钟,取出微波盒冷却至室温,从缓冲液中取出玻片。先用蒸馏水冲洗2次,之后用PBS冲洗2次,每次3分钟。
(2)胰蛋白酶消化修复法:主要用于细胞内抗原的显示。使用0.1%氯化钙液(pH7.8)制成0.1%胰蛋白酶液,37℃孵育切片15~30分钟,之后用PBS洗涤3次,每次3分钟。
(3)胃蛋白酶消化修复方法:主要用于细胞间质抗原的显示。一般使用浓度为0.4%,消化时间为37℃,30~180分钟。
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